El dilluns dia 28/07/2025 a les 10:00h la Sra. Marina Guerrero i Puigdevall ha fet la lectura de la tesi doctoral titulada: "Essential functions of Cdt1 and Orc6 during origin licensing", dirigida per el Dr. Jordi Frigola.
Abstract
El procés de preparació del orígens garanteix que les cèl·lules eucariotes repliquin el seu ADN de manera precisa i només una sola vegada per cicle cel·lular. El complex de ORC, juntament amb les proteïnes carregadores Cdc6 i Cdt1, carreguen el nucli de la helicasa replicativa (M2-7), en forma de doble hexàmer (DH). La preparació comença amb l'assemblatge en forma d’anell, de les proteïnes carregadores al voltant de l’ADN (ORC/Cdc6 o OC). Més tard, aquest complex OC recluta un segon anell, integrat per el nucli de la helicasa i la proteïna de càrrega Cdt1 (M2-7/Cdt1 o MC). Tot seguit i de maneres seqüencial, els dos anells (OC i MC) s’acoblen i acaben formant el DH.
En el llevat, totes les proteïnes implicades en la preparació dels orígens són essencials. Conèixer la funció específica de cadascuna d’elles, a nivell molecular i mecanístic, ha estat una àrea molt intensa de recerca en els darrers 15 anys. Aquesta tesi té com a objectiu entendre la funció essencial de dues d’aquestes proteïnes, Cdt1 i Orc6. Ambdues, comparteixen la característica de ser les úniques proteïnes implicades en aquest procés, que no pertanyen a la superfamília d’ATPases Associades a diverses Activitats cel·lulars (AAA+).
En aquesta tesis hem descobert que la inserció de l’ADN durant la preparació dels orígens, té lloc a través d'una sèrie d'esdeveniments sincronitzats, on Cdt1 hi juga un paper crític. L'acoblament entre els complexes OC i MC permet la inserció de l'ADN de doble cadena dins del M2-7. Aquest procés requereix del domini C terminal de Cdt1 (C-WHD). Sense aquest domini, el nucli de la helicasa es parteix en dos. Concretament, el C-WHD de Cdt1 ha d'interaccionar amb el C-WHD de Mcm6, i aquesta interacció permet l'anclatge, entre els anells MC i OC, unint-se a un domini conservat d’Orc5.
Orc6 té dos dominis, el domini N terminal (NTD) i el domini C terminal (CTD), separats per un llarga regió no estructurada. Els nostres resultats suggereixen que aquests dominis tenen funcions independents durant la preparació dels orígens i, sorprenentment, ambdós són funcionals fins i tot sense estar físicament units. Mentre que el CTD d'Orc6 contribueix al reclutament inicial del complex MC per OC, el NTD és essencial en les últimes etapes de la preparació. En particular, és necessari per tancar i/o estabilitzar la forma tancada del M2-7. Addicionalment, també descrivim com la fosforilació per part de CDK del complex ORC, garanteix que l’ADN només es copiï una sola vegada per cicle cel·lular. Així, mentre que la fosforilació d'Orc2 inhibeix estadis inicials del reclutament del complex MC, la fosforilació d'Orc6 inhibeix la etapa final de la preparació dels orígens, a través del seu NTD.
